光催化材料是一类在特定波长光线照射下，自身不发生永久性消耗，却能通过光生载流子的产生与迁移，催化周围化学反应的功能性材料。光催化材料的抗病毒活性，是指其在光照射下，通过上述光催化反应产生的活性氧物种，破坏病毒结构、抑制病毒复制，最终实现病毒失活的能力。光催化材料抗病毒活性检测有哪些方法步骤？

　　光催化材料抗病毒活性检测方法步骤

　　1.样品准备阶段

　　制备光催化材料样品：将光催化材料制成标准尺寸的试件，或制备光催化涂层；

　　样品预处理：用无菌水或磷酸盐缓冲液（PBS）清洗样品表面，去除杂质，然后在无菌环境中干燥，确保样品表面无微生物污染；

　　病毒悬液制备：在细胞培养瓶中培养目标病毒，待病毒增殖至对数期后，用细胞维持液稀释病毒，制备成浓度为10⁵~10⁷PFU/mL的病毒悬液，备用。

　　2.病毒接种与孵育

　　取0.1mL病毒悬液均匀滴加在光催化材料样品表面，用无菌盖玻片轻轻覆盖，使病毒悬液与样品表面充分接触（避免悬液干燥）；

　　设置对照组：①空白对照组（无材料，仅病毒悬液）；②无光对照组（光催化材料+病毒悬液，但置于黑暗环境，排除材料本身的物理吸附作用）；③阳性对照组。

　　将所有样品（含对照组）置于37℃、5%CO₂的培养箱中孵育1小时，使病毒充分吸附。

　　3.光催化作用阶段

　　按照实验设计的光源条件，对光催化材料样品进行光照处理，光照时间根据材料性能设定（通常为0.5~4小时）；

　　无光对照组需全程避光，其他条件与光催化组一致。

　　4.病毒滴度测定（空斑实验法）

　　光照结束后，向每个样品表面加入1mL含1%胎牛血清的PBS，用移液器反复吹吸，洗脱残留的病毒，收集洗脱液；

　　将洗脱液进行10倍梯度稀释（从10⁰到10⁻⁶），取每个稀释度的洗脱液0.1mL，分别接种至已长满单层宿主细胞（如MDCK细胞用于流感病毒，Vero细胞用于SARS-CoV-2）的培养皿中；

　　孵育1小时后，向培养皿中加入含1%琼脂糖的细胞维持液，覆盖细胞表面，防止病毒扩散；

　　继续培养3~7天（根据病毒增殖周期调整），待空斑（病毒感染细胞后形成的透明区域）形成后，用结晶紫染色，计数每个培养皿中的空斑数量，计算病毒滴度（PFU/mL）。

　　5.结果计算与判定

　　抗病毒活性用病毒灭活率表示，计算公式为：

　　病毒灭活率（%）=[1-（光催化组病毒滴度/无光对照组病毒滴度）]×100%

　　判定标准：根据标准要求，当病毒灭活率≥99%（即log₁₀降低值≥2）时，可判定该光催化材料具有显著的抗病毒活性；若灭活率≥99.9%（log₁₀降低值≥3），则为高效抗病毒材料。